产品货号：
KD0566
中文名称：
GS115化学感受态细胞
英文名称：
GS115 Chemically Competent Cell
产品规格：
10×100μL
发货周期：
1～3天
产品价格：
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GS115是毕赤酵母菌株，属于真核细胞。一般的针对原核生物的抗生素例如卡那和氨苄对酵母是无效的，因此为了防止大肠杆菌等原核生物对酵母培养菌株污染，往往会在培养基中加入一些氨苄和卡那霉素的抗生素，来抑制细菌菌的污染和生长。GS115毕赤酵母自身表型为Mut+，但是GS115转化株既能够产生出Mut+菌株，也能够产生出Muts菌株。目的蛋白在这两种转化株的表达水平可能是不同的，并且具有不可预测性，所以只有通过实验才能得到最好的酵母表达方案。 注：本菌株的基因型为His4，表型是Mut+。
毕赤酵母适宜的生长温度是28至30℃，温度超过32℃对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。GS115毕赤酵母是是组氨酸缺陷型(His4基因型)，如果表达载体上携带有组氨酸基因，可补偿宿主菌的组氨酸缺陷，因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。这些受体菌自发突变为组氨酸野生型的概率一般低于10-8。GS115毕赤酵母可以在YPD培养基中生长，或者在补充有组氨酸的minimal media中生长，但是无法在单独的minimal media培养基中生长。质粒转化毕赤酵母GS115的菌株的方法有很多，如电转化、化学转化等。根据实验方法的不同，用的试剂和培养基有所不同。本手册提供一个化学转化方法。
产品组成：
| 组分 | 规格 | 保存 |
| GS115化学感受态细胞 | 10×100μL | -80℃，6个月 |
| Carrier DNA(10μg/μL) | 100μL | -20℃，2年 |
| B2溶液(转化液) | 20mL | -20℃，2年 |
| B3溶液(悬浮液) | 11mL | -20℃，2年 |
注：本菌株的基因型为His4，表型是Mut+。
- 初次使用Carrier DNA，请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5min，然后立即放在冰上(可重复一次)，用后放在-20℃储存备用。下次使用前请于冰上解冻Carrier DNA。反复冻融3～5次后需重新变性Carrier DNA。
- 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
- 同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
- 毕赤酵母适宜的生长温度是28至30℃，温度超过32℃对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。
使用方法：
- 取0.1～5μg质粒DNA(线性化质粒加入量5～50μg)和10μL预变性Carrier DNA，加入到未融化的100～200μL感受态细胞上，置于30℃水浴，每隔15 S颠倒混匀，直至感受态细胞刚好完全融化(融化后及时取出)。
注：质粒是否需要线性化，根据实验需求而定。 - 加入1.4mL B2溶液颠倒混匀。30℃水浴60min，每隔20min颠倒混匀。
- 3000rpm离心3min弃上清留菌体沉淀，加入1mL B3溶液重悬菌体。
- 3000rpm离心3min弃上清留菌体沉淀，加入100μL B3溶液重悬菌体。
- 将100μL菌液全部涂布到相应的平板培养基，30℃恒温培养3～5天，直至平板出现酵母克隆。
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